農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀蔬菜中有機(jī)磷國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法1. 范圍 

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了由酶抑制法測(cè)定蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速篩選測(cè)定。測(cè)試方法  酶抑制率法

2. 原理

在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在410nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。

3.試劑

3.1 pH8.0緩沖溶液：分別取43.5g無(wú)水磷酸氫二鉀與2.2g磷酸二氫鉀，用510mL蒸餾水溶解。

3.2 顯色劑：分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4°C冰箱中保存。

3.3 底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.1mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩１４嫫诓怀^(guò)十天。

3.4 乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3 min的吸光度變化D A0值應(yīng)控制在0. 3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫４嫫诓怀臁?

3.5 可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔA0值應(yīng)控制在0.3以上。

4 儀器

4.1 GY-NC農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀。

4.2常量天平。

4.3 恒溫水浴或恒溫箱

5 分析步驟

5.1 樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，靜制十五分鐘，之間需振蕩幾次，待用。

5.2 對(duì)照溶液測(cè)試： 先于試管中加入2.5mL緩沖溶液，依次加入0.lmL酶液、0.1mL顯色劑、0.lmL底物搖勻，此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3 min的吸光度變化值ΔA0。

5.3 樣品溶液測(cè)試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，但在加底物之前必須放置15分鐘，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAt。

6 結(jié)果的表述計(jì)算

6.1 結(jié)果計(jì)算

檢測(cè)結(jié)果按公式計(jì)算：抑制率(%)=[ (ΔA0-ΔAt)/ ΔA0]×100 

式中：ΔA0 －對(duì)照溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值； 

ΔAt －樣品溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值；

6.2 結(jié)果判定

結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。

對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

7 附則

7.1酶抑制率法技術(shù)指標(biāo)

7.1.1 靈敏度指標(biāo)：酶抑制率法對(duì)部分農(nóng)藥的檢出限見(jiàn)表2酶抑制率法對(duì)部分農(nóng)藥的檢出限

表2 酶抑制率法對(duì)部分農(nóng)藥的檢出限

農(nóng)藥名稱(chēng) 檢出限mg/kg 農(nóng)藥名稱(chēng) 檢出限mg/kg

敵敵畏 0.1 氧化樂(lè)果 0.8

對(duì)硫磷 1.0 甲基異柳磷 5.0

辛硫磷 0.3 滅多威 0.1

甲胺磷 2.0 丁硫克百威 0.05

馬拉硫磷 4.0 敵百蟲(chóng) 0.2

樂(lè)果 3.0 呋南丹 0.05

7.1.2 符合率：在檢出的抑制率≥50％的30份以上樣品中，經(jīng)氣相色譜法驗(yàn)證，陽(yáng)性結(jié)果的符合率應(yīng)該在80％以上。

8說(shuō)明

8.1蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)樣品時(shí)，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測(cè)定法。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，減少色素的干擾。

8.2 當(dāng)溫度條件低于37度，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相應(yīng)延長(zhǎng)，延長(zhǎng)時(shí)間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min吸光度變化差值在0.3以上，即可往下操作。注意樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照溶液放置時(shí)間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min吸光度變化差值在0.3以下的原因：一是酶的活性不夠，二是溫度太低。